来源:汪清新闻网 | 2023-03-17 14:20:37 |
EnVision法又称为ELPS法,抗原—抗体反应结合后,第二抗体上标记有多聚化合物(葡聚糖)酶复合物(EnVision复合物),与第一抗体结合,进而由酶作用底物进行显色定位。EnVision复合物是利用一种多聚化合物将HRP或AKP和第二抗体(抗鼠或抗兔IgG)同时标记在一个多聚化合物上,即形成酶—多聚化合物—第二抗体巨大复合物。每1个分子的复合物中约含?o个分子的HRP和10个分子的第二抗体,复合物中的HRP的绝对数量远高于其他复合物(如ABC),本身已具备高度放大作用,因此EnVision法敏感性显著高于其他方法。复合物中存在多个第二抗体,也增加了该复合物与特异性抗体的结合机会。同时,人体内不存在该多聚化合物,无非特异性干扰,故背景染色浅。此外,染色步骤为两步,且第二抗体孵育时较短,使该方法更省时而简便。
EnVision法的操作流程是什么?
(1)4弘m常规石蜡切片经烤片后,常规二甲苯、乙醇脱蜡至水,PBS洗3minX3次。
(2)预处理组织切片(可用酶消化或AR或不作任何处理,依一抗质量而定)。
(3)PBS洗3rainX3次。
(4)0.3%H202阻断内源性过氧化物酶15rain,PBS洗3rainX 3次。
(5)适当稀释特异性一抗,37~C孵育几,PBS洗3minX3次。
(6)EnVision复合物(即用型)孵育30min,PBS洗3minx3次。
(7)水洗,复染,常规树胶封片。
(8)结果观察。
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